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10% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠

10% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠

產(chǎn)品編號:RTH5102-0010

產(chǎn)品規(guī)格:10%

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥1000

10% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠

名稱

貨號

規(guī)格

10% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠

12孔)

RTH5102-0010

10/

產(chǎn)品介紹:

RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠適用于 10-1000 個(gè)堿基長度的單鏈 DNA或 RNA的分析和純化,可用于合成寡核苷酸分析和純化、RNA 酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)、體外轉(zhuǎn)錄研究和 RNA 印跡實(shí)驗(yàn)等。是一款安全、快捷、高性能的預(yù)制凝膠,即開即用無需自行配置各種試劑及灌膠操作,采用全自動化灌膠技術(shù),大大降低批間差異。核酸條帶均一性好,分辨率高。兼容市場上主流的 mini 電泳槽, 如 Bio-Rad,天能,六一和君意東方等。

產(chǎn)品參數(shù):

預(yù)制膠板尺寸:長 9.8 cm,寬8.4 cm,厚度為4.1 mm

預(yù)制膠尺寸:長 8.1 cm,寬  7.4 cm,厚度為1.1 mm

梳孔:12 孔

包裝規(guī)格:10板/盒

最大上樣量:30 μl(12 孔)

產(chǎn)品貨號及選擇:

貨號

分離膠濃度

孔數(shù)

最大上樣量

電泳緩沖液

最佳分離范圍

溴酚藍(lán)位置

RTH5102-0005

5%

12

30 μl

1×TBE

200-1000 nt

~35 nt

RTH5102-0010

10%

12

30 μl

1×TBE

25-350 nt

~15 nt

RTH5102-0015

15%

12

30 μl

1×TBE

10-150 nt

~10 nt

貯存、效期及運(yùn)輸:

    預(yù)制膠4-8℃貯存,切勿置于0oC以下冷凍;有效期30天;常溫運(yùn)輸。

使用說明:

. 樣品準(zhǔn)備:

1.1單鏈DNA樣品加入等體積的2×TBE尿素上樣緩沖液(用于尿素變性膠)(貨號:DL080);RNA樣品加入等體積的2×RNA上樣緩沖液 (尿素變性膠,RNase-free) (貨號:RTE4103-05);70℃孵育5分鐘以充分變性核酸以打開核酸的二級結(jié)構(gòu),立即置于冰水浴中。 建議每孔上樣0.2-05 μg左右即可。

1.2 TBE-尿素-PAGE電泳可以選擇單鏈DNA Marker(25-75 nt)(貨號:RTM501)或單鏈DNA Marker (15-120nt)(貨號:RTM506)或單鏈DNA Marker(10-75 nt)預(yù)混型(貨號:RTM 508)作為分子量標(biāo)準(zhǔn)。

. 電泳液的準(zhǔn)備:

取 5×TBE(貨號:TB001),加入去離子水稀釋為1×,制備成 1×TBE buffer。對于RNA樣品電泳,取5×TBE(RNase-free)(貨號:TB001F),加入RNase-free水/DEPC水(貨號:RF001-02)稀釋為 1×,制備成  1×TBE buffer。

1×TBE電泳緩沖液配制方法

終濃度

順序

原料

1

5

89 mM

1

Tris [MW121.14]

10.8

54

2 mM

2

EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]

0.744

3.72

89 MM

3

硼酸 [MW61.83]

5.5

27.5

 

4

超純水最后定容至

1

5

 

 

最后pH8.2-8.3之間,可以不用調(diào)節(jié)pH,記錄每批pH


. 電泳:

3.1 將預(yù)制膠從包裝袋中取出,裝入兼容的電泳槽中,加入電泳緩沖液,再緩慢地將梳子拔出。


注:伯樂Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向(下圖)。

六一其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI,Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。


3.2內(nèi)槽加滿電泳液,外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可,1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次,去除殘余的尿素

3.3 上樣:在梳孔內(nèi)加入適當(dāng)濃度和體積的樣品。

注:最佳上樣量須通過實(shí)驗(yàn)來確定,樣品過量較易導(dǎo)致條帶拖尾。

3.4 將電泳槽蓋子蓋好,并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅,黑對黑)。一般在150V電壓,電泳50-90分鐘,根據(jù)溴酚藍(lán)的位置大體判斷條帶大小位置,停止電泳。

 

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時(shí)間

適用條件

推薦電壓

150V

15-20 mA/板膠

5-10 mA/板膠

60+ min

最佳電壓,最優(yōu)的分辨率


變性膠濃度

溴酚藍(lán)

二甲苯菁

5%

~35 nt

~130 nt

10%

~15 nt

~55 nt

15%

~10 nt

~52 nt

3.5 取出玻璃膠板,稍加用力慢慢扳開或用刮板輕輕撬開玻璃膠板,將凝膠取出。

. 染色:

單鏈DNA或RNA樣品可以用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(貨號:RTS5102)或核酸快速高靈敏度染色試劑盒(貨號:RTS5101)染色均可以得到清晰的條帶分離效果。注:如果使用核酸染料染色,RealSafe Red(貨號:GR002)或RealSafe All(貨號:GR004)核酸染料結(jié)合單鏈核酸效果最佳,強(qiáng)烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed,Goldview,EB等染色效果不好。

以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進(jìn)行染色。

4.1  漂洗:拆下凝膠后,適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。

4.2  染色液配制:

即用型RealSafe Red核酸染色液配制

1×TBE

RealSafe Red核酸染料

10-20 μl

4.3 染色:

凝膠浸泡于即用型染色液中,常溫避光搖床40-60 rpm  染色30 分鐘。

4.4 觀察:

紫外燈或藍(lán)光儀上觀察條帶。

實(shí)驗(yàn)示例:



 
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