5% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預制膠

● 產品介紹：

RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預制膠適用于 10-1000 個堿基長度的單鏈 DNA或 RNA的分析和純化，可用于合成寡核苷酸分析和純化、RNA 酶保護實驗、體外轉錄研究和 RNA 印跡實驗等。是一款安全、快捷、高性能的預制凝膠，即開即用無需自行配置各種試劑及灌膠操作，采用全自動化灌膠技術，大大降低批間差異。核酸條帶均一性好，分辨率高。兼容市場上主流的 mini 電泳槽， 如 Bio-Rad，天能，六一和君意東方等。

產品參數(shù)：

預制膠板尺寸：長 9.8 cm，寬8.4 cm，厚度為4.1 mm

預制膠尺寸：長 8.1 cm，寬  7.4 cm，厚度為1.1 mm

梳孔：12 孔

包裝規(guī)格：10板/盒

最大上樣量：30 μl（12 孔）

● 產品貨號及選擇：

● 貯存、效期及運輸：

    預制膠4-8℃貯存，切勿置于0oC以下冷凍；有效期30天；常溫運輸。

● 使用說明：

一. 樣品準備：

1.1單鏈DNA樣品加入等體積的2×TBE尿素上樣緩沖液（用于尿素變性膠）（貨號：DL080）；RNA樣品加入等體積的2×RNA上樣緩沖液 (尿素變性膠，RNase-free) （貨號：RTE4103-05）；70℃孵育5分鐘以充分變性核酸以打開核酸的二級結構，立即置于冰水浴中。 建議每孔上樣0.2-05 μg左右即可。

1.2 TBE-尿素-PAGE電泳可以選擇單鏈DNA Marker（25-75 nt）（貨號：RTM501）或單鏈DNA Marker （15-120nt）（貨號：RTM506）或單鏈DNA Marker（10-75 nt）預混型（貨號：RTM 508）作為分子量標準。

二. 電泳液的準備：

取 5×TBE（貨號：TB001），加入去離子水稀釋為1×，制備成 1×TBE buffer。對于RNA樣品電泳，取5×TBE（RNase-free）（貨號：TB001F），加入RNase-free水/DEPC水（貨號：RF001-02）稀釋為 1×，制備成  1×TBE buffer。

1×TBE電泳緩沖液配制方法

三. 電泳：

3.1 將預制膠從包裝袋中取出，裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽可以直接使用預制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。

3.2內槽加滿電泳液，外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。

3.3 上樣：在梳孔內加入適當濃度和體積的樣品。

注：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量較易導致條帶拖尾。

3.4 將電泳槽蓋子蓋好，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅，黑對黑)。一般在150V電壓，電泳50-90分鐘，根據(jù)溴酚藍的位置大體判斷條帶大小位置，停止電泳。

3.5 取出玻璃膠板，稍加用力慢慢扳開或用刮板輕輕撬開玻璃膠板，將凝膠取出。

四. 染色：

單鏈DNA或RNA樣品可以用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒（貨號：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（貨號：RTS5102）或核酸快速高靈敏度染色試劑盒（貨號：RTS5101）染色均可以得到清晰的條帶分離效果。注：如果使用核酸染料染色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核酸染料結合單鏈核酸效果最佳，強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。

以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進行染色。

4.1  漂洗：拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。

4.2  染色液配制：

4.3 染色：

凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm  染色30 分鐘。

4.4 觀察：

紫外燈或藍光儀上觀察條帶。

● 實驗示例：