非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問(wèn)題

非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問(wèn)題

1. 所有的預(yù)染蛋白Marker都是變性Marker，不適用于非變性電泳。

2. 蛋白非變性電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小。因?yàn)樵诜亲冃詶l件下，蛋白的電荷，空間結(jié)構(gòu)，物化性質(zhì)等都對(duì)蛋白的遷移有影響。

3. 非變性蛋白電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然結(jié)構(gòu)，都沒(méi)有偶聯(lián)染料，在電泳時(shí)基本都看不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見(jiàn)淡黃色，其中440 kD顏色更深。凝膠轉(zhuǎn)膜后，膜上也可以看到黃色的440 kD條帶（下圖），可以大體判斷Marker轉(zhuǎn)膜的效果。

4. 有兩種方法可以解決非變性Marker轉(zhuǎn)膜后條帶顯示問(wèn)題：

第一種方法：凝膠轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色液（貨號(hào)：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。

       注：北京師范大學(xué)惠贈(zèng)圖片

第二種方法（下圖）：電泳結(jié)束后，把含有Marker泳道的凝膠切下，單獨(dú)用考馬斯亮藍(lán)染色液染色（貨號(hào)：RTD6202），剩余的凝膠去完成轉(zhuǎn)膜到ECL發(fā)光檢測(cè)過(guò)程，最后的發(fā)光結(jié)果和Marker染色結(jié)果拼接判斷條帶范圍。