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非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問題
http://hnyjdw.com/news_detail.aspx?NewsID=248
寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（21-880
kD）
Broad
MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880
kD）
●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTD6144 20次 100
μl
●儲(chǔ)存及運(yùn)輸條件：
-20℃保存，濕冰運(yùn)輸，有效期為12個(gè)月。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品有5種蛋白組成，分子量范圍為21-880
kD，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到5條主帶。
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蛋白名稱
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分子量(kD)
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蛋白來源
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pI
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說明
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非變性下440kD和880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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單體分子量29kD，非變性下為10聚體，低于300kD有電荷異構(gòu)體（charge
isomer）
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Lactic
Dehydrogenase
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165
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Microorganism
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4.5
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球蛋白，單體分子量36 kD，非變性下可形成四聚體
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或4.59
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球蛋白，分子量為45kD，非變性條件下大于45kD會(huì)出現(xiàn)電荷異構(gòu)體（charge
isomer）
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Trypsin
Inhibitor
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21
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Soybean
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4.5
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非變性下21 kD
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● 使用說明：
1. 取出產(chǎn)品后，常溫融化后，徹底混勻，上樣電泳。
注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整上樣量。
2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6130）或者蛋白預(yù)制膠（貨號(hào)RTD6118）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進(jìn)行非變性電泳。
3. 電泳條件：
建議使用10%非變性膠或者4-20%梯度非變性膠（貨號(hào)：RTD6118-0420）進(jìn)行電泳。
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恒電壓
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120 V
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起始電流
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27-35 mA/板膠
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結(jié)束電流
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7-10 mA/板膠
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電泳時(shí)間
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1h20min+
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4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察結(jié)果。
注：使用銀染染色時(shí)，由于靈敏度高于考馬斯亮藍(lán)染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。
注意：
1. 本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳（SDS-PAGE），因?yàn)樵?/span>SDS存在下，含有多個(gè)亞單位的蛋白會(huì)不同程度解聚。
2. 在非變性條件下，蛋白的遷移與蛋白的電荷、蛋白形狀以及蛋白分子量都有關(guān)。因此，在一種凝膠濃度下使用本Marker不能精確估計(jì)出目的蛋白的分子量。非變性電泳中，蛋白分子量的確定應(yīng)該是在不同凝膠濃度下，確定出蛋白的Rf值，繪制出凝膠濃度對(duì)Rf的曲線從而判定蛋白的分子量。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
1 4-20% Tris-甘氨酸 非變性膠電泳：
4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA 47min
2. 4-16% Blue Native：
3： 4-15% Tris-甘氨酸非變性：
