高純質粒小提試劑盒（目錄號：RTP2101）
● 試劑盒內容及保存：
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試劑盒組成
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RTP2101-02 （100次）
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RTP2101-03 （200次）
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貯存
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RNase A
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300 μl
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600 μl
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-20℃
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Lysis Dye
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600μl
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2×600μl
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室溫
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溶液P1
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30 ml
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60 ml
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室溫 （加入RNase
A后2-8℃保存）
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溶液P2
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30 ml
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60 ml
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室溫
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溶液P3
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40 ml
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80 ml
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室溫
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去蛋白液PD
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60 ml
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120 ml
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室溫
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漂洗液PW
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25 ml
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2×25
ml
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室溫
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洗脫緩沖液EB
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15 ml
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15 ml
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室溫
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質粒吸附柱CP
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100個
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2×100個
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室溫
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收集管（2 ml）
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100個
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2×100個
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室溫
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說明書
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1份
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1份
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● 儲存條件和效期：
本試劑盒在室溫（25℃左右）干燥條件下，可保存1年；更長時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，應在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。單獨包裝的RNase A 在-20℃可穩(wěn)定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1應置于2–8℃保存，可穩(wěn)定保存半年。
● 產品簡介及使用說明：
本試劑盒采用經典的堿裂解法裂解細菌，再通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合DNA的特性，可以從1–5ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中快速提取3–20μg純凈的高拷貝質粒DNA。提取的質?？蛇m用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等實驗。然而，對質粒純度要求更高的轉染實驗（要求無內毒素），此試劑盒不能達到要求。另外，盡管該試劑盒可以抽提較大的質粒（>10kb），但我們不推薦使用。如果一定要使用，請參考以下方法：加大菌體使用量（使用5–10 ml過夜培養(yǎng)物），同時按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脫緩沖液應在70℃預熱，在吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率，其它步驟相同。
● 產品特點：
1使用了Lysis Dye，菌體裂解是否完全一目了然。由于判斷菌體裂解和中和是否徹底更主要取決于操作者的經驗，所以我們增加了Lysis Dye（一種能使裂解/中和體系變換顏色的試劑）來幫助觀察裂解/中和的程度。加入P1后，Lysis Dye使菌液變?yōu)闇啙岬募t色；加入P2后，Lysis Dye立即使溶液變?yōu)槌吻宓募t色，裂解是否完全只要觀察紅色溶液是否澄清，如果紅色非常均一，表明裂解充分；在完全裂解的體系中加入P3混勻后，體系立即變?yōu)辄S色，任何紅色的殘留表明沒有完全混勻或者中和不徹底。
2 增加了去蛋白液PD，能更加徹底地去除蛋白污染，得到純度更高的質粒。
● 準備工作：
1 將試劑盒附帶的RNase A全部加入到溶液P1中（如15ml P1中加入150μl RNase A），混勻后4℃貯存。
2 按照標簽所示在漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存?zhèn)溆谩?/span>
3 每次使用前請檢查溶液P2，溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成，如果出現(xiàn)沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。
● 使用Lysis Dye的標準操作步驟：
如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1． 取1–5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，10,000g 離心1分鐘，盡量吸除上清。
注：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。
2． 向菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1（請先檢查是否已加入RNaseA）和5μl Lysis Dye，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀，此時溶液為渾濁的紅色。
注：如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6–8次使菌體充分裂解，此時溶液變?yōu)槌吻宓募t色。
注：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA；所用時間絕對不應超過5分鐘 ，以免質粒受到破壞；紅色溶液應該透明均一，如有渾濁紅色顆粒，表明裂解不充分，會大大降低質粒提取效率。
4． 加入350 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉，充分混勻，混勻充分的標志是溶液完全呈透明的黃色，如有可見紅色，說明混勻不徹底。10,000g 離心10分鐘。
注：P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。
左側未完全混勻，有紅色；右側完全混勻，呈均勻黃色
5． 小心地將上清轉移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
6．向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD，10,000g離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
7． 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW，10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液。
9. 將吸附柱CP置于重新放回收集管中，10,000g 離心2分鐘。
注：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，絕對不可省略，因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)實驗（酶切，PCR等）。
10. 將吸附柱CP置于一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB，室溫放置2分鐘，10,000g 離心2分鐘將質粒溶液收集到離心管中，-20℃保存。
注：● 為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入離心吸附柱中，再次離心收集。
● 洗脫緩沖液體積不應少于50
μl，體積過小影響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低
洗脫效率。
●不使用Lysis Dye的標準操作步驟：
如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1． 取1–5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，10,000
g離心1分鐘，盡量吸除上清。
注：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。
2． 向菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1（請先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。
注：如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6–8次使菌體充分裂解。
注：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA；所用時間絕對不應超過5分鐘，以免質粒受到破壞。
4． 加入350 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉6–8次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。10,000g 離心10分鐘。
注：P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5． 小心地將上清轉移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
6．向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD，10,000g離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
7． 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP重新放回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500
μl漂洗液PW，10,000g 離心30–60秒，倒掉收集管中的廢液。
8. 將吸附柱CP置于收集管中，10,000g 離心2分鐘。
注：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，絕對不可省略，因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)實驗（酶切，PCR等）。
9． 將吸附柱CP置于一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100
μl洗脫緩沖液EB，室溫放置2分鐘，10,000g離心2分鐘將質粒溶液收集到離心管中，-20℃保存。
注：● 為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入離心吸附柱中，再次離心收集。
● 洗脫緩沖液體積不應少于50 μl，體積過小影響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。
質粒提取試劑盒 RTP2101/RTP2102發(fā)表文章
1. A weird DNA band in PCR and its cause.
Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Journal of Plant Science & Molecular
Breeding Volume 5 Article 2 2016
Institution：Haikou
experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link：https://doi.org/10.7243/2050-2389-5-2
2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR
to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.
Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan
Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846
3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical
GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human
osteosarcoma
Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao
Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong
Product: RTP2101 高純質粒小提試劑盒
Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21
Institution：School of
Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University
Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554
4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI)
Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis
in Pogostemon cablin
Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang,
Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021
Institution：College
of Horticulture, Hainan University
Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0
5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic
analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case
Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen,
Lili Zhao, Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Comparative Immunology, Microbiology
and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0147957123001108