RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠(U型板，通用型，12孔)

       RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)

● 貨品規(guī)格：

● 產(chǎn)品簡介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質(zhì)膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質(zhì)復(fù)合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復(fù)合體從細(xì)胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍(lán) G-250 代替 SDS與蛋白結(jié)合而使其帶負(fù)電荷，根據(jù)蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài)，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍(lán)G-250存在，使蛋白都覆蓋上負(fù)電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。

本產(chǎn)品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復(fù)合體，樣品可以來于胞漿、細(xì)胞總裂解液、細(xì)胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。

● 運輸和貯存：

本產(chǎn)品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期12個月。

● 使用說明：

1. 樣品制備：

   該產(chǎn)品不含樣品制備的相關(guān)試劑，根據(jù)樣品種類選擇不同提取方法。植物類囊體BN樣品制備可以選擇植物類囊體膜提取試劑盒（貨號:RTU5002）；動物總蛋白BN樣品制備可以選擇

2. 電泳：

2.1 拆開預(yù)制膠包裝，將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準(zhǔn)備電泳緩沖液：

將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液（干粉）溶于500 ml滅菌水中，徹底溶解，測定pH應(yīng)為7.0左右，不要調(diào)節(jié)pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳：

陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳：

陽極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液，陰極緩沖液按照下表配制：

2.3準(zhǔn)備樣品：

2.3.1 CN-PAGE電泳：

2.3.2 BN-PAGE電泳：

2.3.2.1 植物類囊體膜蛋白電泳：

*植物類囊體膜蛋白電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：

植物類囊體樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終濃度為2%，則需要G-250終濃度為0.5%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料1 μl。

2.3.2.2 動物線粒體BN樣品電泳：

*動物線粒體BN樣品電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：

2.4電泳過程；

2.4.1 CN-PAGE電泳：

電泳內(nèi)外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預(yù)制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.4.2 BN-PAGE電泳：

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內(nèi)槽開始電泳使用的是1×藍(lán)色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續(xù)后續(xù)電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續(xù)的轉(zhuǎn)膜實驗。

BN-PAGE電泳條件（一板膠）

3. 轉(zhuǎn)膜：

BN-PAGE轉(zhuǎn)膜必須用PVDF膜，不能用NC膜，因為NC膜與G-250結(jié)合非常緊密，不易去除。轉(zhuǎn)膜后PVDF膜上的藍(lán)色染料可以用無水甲醇漂洗去除。轉(zhuǎn)膜緩沖液推薦使用10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號：BC600P）。

4. 染色：

4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液或常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘即可見。

4.2 搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至條帶清晰可見。

4.3 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至背景干凈。

4.4 觀察保存結(jié)果。

5. 實驗示例：

BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩(wěn)壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳

Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)

使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit development in tomato plants

Author: Jinyan Li, Keru Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo, Hongliang Zhu

Journal: New Phytologist  2023，Volume237, Issue4，F(xiàn)ebruary 2023，Pages 1188-1203

Institution： China Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1111/nph.18594

2. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin, Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3

3. [2022 IF2.6] What are the main proteins in the hemolymph of Haemaphysalis flava ticks?

Author: Dan Li , Lei Liu , Zi-ling Liu , Yuan Tian , Xin Gao，Tian-yin Cheng

Journal: Frontiers in Veterinary Science  Published 17 July 2024

Institution: Hunan Agricultural University

Paper link： https://doi.org/10.3389/fvets.2024.1387719