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RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒 12%

RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒 12%

產(chǎn)品編號(hào):RTD6132-12

產(chǎn)品規(guī)格:12%

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥300

RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒

 RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit

●  貨品規(guī)格:

貨號(hào)

說明

制膠數(shù)量

RTD6132-06

制備6%PAGE

125 0.75mm

901 mm

601.5 mm

RTD6132-08

制備8%PAGE

RTD6132-10

制備10%PAGE

RTD6132-12

制備12%PAGE

RTD6132-15

制備15%PAGE

●  貨品內(nèi)容:

組份

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

保存

1

RTD6132-UA

上層膠溶液A

80 ml

4

2

RTD6132-UB

彩色上層膠溶液B

80 ml

4

3

RTD6132-LA06

下層膠溶液A 6%

250 ml

4

RTD6132-LA08

下層膠溶液A 8%

250 ml

4

RTD6132-LA10

下層膠溶液A 10%

250 ml

4

RTD6132-LA12

下層膠溶液A 12%

250 ml

4

RTD6132-LA15

下層膠溶液A 15%

250 ml

4

4

RTD6132-LB

下層膠溶液B

250 ml

4

5

RTD6132-SP

改良型促凝劑

8 ml

4℃,配制后-20℃貯存

說明書

一份

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

該產(chǎn)品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理,采用合理設(shè)計(jì)的預(yù)混合配方和配制流程,可在50分鐘內(nèi)配制得到高質(zhì)量的聚丙烯酰胺凝膠,用于變性和非變性蛋白凝膠電泳。本產(chǎn)品可以配制常用分離膠濃度6%、8%、10%、12%和15%,可以滿足絕大多數(shù)蛋白電泳需求。

本試劑盒大約可以配制60-125塊常規(guī)大?。?×10cm)PAGE凝膠,具體數(shù)量根據(jù)凝膠厚度決定:0.75mm厚度凝膠可以配制125塊膠,1mm厚度凝膠可以配制至少90塊膠,1.5mm厚度凝膠可以配制至少60塊膠。

● 運(yùn)輸和貯存:

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸;組份按照標(biāo)簽溫度貯存;有效期一年。

● 特點(diǎn):

1. 方便:彩色上層膠,方便上樣;上層膠和下層膠溶液1:1混合,無(wú)需計(jì)算;

2. 安全:不用接觸有毒粉末;不用單獨(dú)添加TEMED;

3. 兼容性廣:制膠溶液中不含SDS,可用于非變性電泳(Native-PAGE);

● 使用說明:

  凝膠制備:

1.1參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

1.2 根據(jù)下表參考選擇合適的凝膠濃度

表一不同濃度的PAGE下層膠的最佳分離范圍

下層膠(分離膠)濃度

最佳分離范圍

6%

50-350 kD

8%

35-300 kD

10%

20-150 kD

12%

15-100 kD

15%

10-80 kD










1.3 根據(jù)下表配制凝膠:

表二 凝膠配制表

下層膠配方

上層膠配方

膠厚度

下層膠溶液B

下層膠溶液A

改良型促凝劑

膠厚度

彩色上層膠溶液B

上層膠溶液A

改良型促凝劑

0.75 mm

2 ml

2 ml

40 μl

0.75 mm

0.5 ml

0.5 ml

10 μl

1.0 mm

2.5 ml

2.5 ml

50 μl

1.0 mm

0.75 ml

0.75 ml

15 μl

1.5 mm

4 ml

4 ml

80 μl

1.5 mm

1 ml

1 ml

20 μl

1.3.1 取等體積下層膠溶液B 和下層膠溶液A ,各 2.0/2.5/4.0 ml,混勻;

1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的改良型促凝劑,輕輕混勻,將混勻后的溶液注入制膠玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長(zhǎng)0.5 cm即可;

注意:此溶液為過量,請(qǐng)勿全部注入。

1.3.3 沿玻璃板緩慢加入適量滅菌水或無(wú)水乙醇覆蓋于下層膠之上,待下層膠凝固后,倒去上層水或乙醇;

注意:當(dāng)水(乙醇)和膠之間有一條折射線時(shí),說明膠已凝固;25℃時(shí)5-10分鐘可以聚合。

1.3.4 取等體積彩色上層膠溶液B和上層膠溶液A ,各 0.5/0.75/1.0 ml,混勻;

1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的改良型促凝劑,輕輕混勻,插入梳齒;

1.3.6 待上層膠凝固后 (約20-40 min),拔去梳齒即可用于電泳。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。

上層膠25℃ 20-25分鐘可以聚合;18℃ 35-40分鐘可以聚合。

  電泳:

2.1 SDS-PAGE變性電泳:

2.1.1電泳緩沖液配制:

將5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液干粉(自備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris,0.5% SDS)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調(diào)節(jié)pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

2.1.2 樣品處理:融化-混合-變性-上樣

5×MonoColor蛋白上樣緩沖液常溫?cái)?shù)分鐘解凍后輕輕搖勻,以確保溶液混合均勻;將緩沖液與蛋白樣品按照1:4的比例混勻,如8 μl樣品加入2 μl 5×上樣緩沖液;將蛋白樣品置于95℃中加熱5-10分鐘;蛋白樣品加入凝膠加樣孔內(nèi)電泳。

2.1.3 電泳過程;

在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

表三 SDS-PAGE電泳條件

恒電壓

起始電流(一板膠)

結(jié)束電流(一板膠)

電泳時(shí)間

適用條件

150V

35-40 mA

15-20 mA

55 + min

最佳電壓,最優(yōu)的分辨率

200V

45-55 mA

20-25 mA

45+ min

節(jié)省時(shí)間

225V

40-50 mA

15-20 mA

35+ min

250V

65-75 mA

20-25 mA

30+ min

300V

70-80 mA

25-35mA

25+ min

最省時(shí)間

2.2 非變性電泳(Native PAGE):

2.2.1電泳緩沖液配制:

將5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液干粉(自備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調(diào)節(jié)pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。

2.2.2 樣品處理:融化-混合-上樣

5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液常溫?cái)?shù)分鐘解凍后輕輕搖勻,以確保溶液混合均勻;將緩沖液與蛋白樣品按照1:4的比例混勻,如8 μl樣品加入2 μl 5×上樣緩沖液;蛋白樣品加入凝膠加樣孔內(nèi)電泳。注:非變性電泳樣品不能加熱處理。

2.2.3 電泳過程;

在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

 

 

表四 Native PAGE電泳條件

 

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時(shí)間

適用條件

推薦電壓

150V

25-35/板膠

5-10 mA/板膠

60 + min

最佳電壓,最優(yōu)的分辨率

染色:

1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量FastBlue蛋白染色液或常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

2. 搖床常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘至條帶清晰可見。

3. 加入適量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘至背景干凈。

4. 觀察保存結(jié)果。


實(shí)驗(yàn)示例:


 
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