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Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(多肽變性電泳)

Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(多肽變性電泳)

產(chǎn)品編號:RTD6122

產(chǎn)品規(guī)格:25次

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥300


Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(適用于多肽電泳)     說明書Ver 740056

 

貨號

名稱

規(guī)格

RTD6122

Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

25

 

產(chǎn)品組成:

序號

組分貨號

名稱

規(guī)格

貯存

1

RTD6122-01

濃縮膠緩沖液

20 ml

4

2

RTD6122-02

分離膠緩沖液

65 ml

4

3

RTD6122-03

濃縮膠聚合溶液

20 ml

4

4

RTD6122-04

分離膠聚合溶液

65 ml

4

5

AP020P

10% APS(干粉)

5 ml

常溫

配制后-20℃

6

TA0761-01

TEMED

0.5 ml

常溫

7

CB010P

10×Tris-Tricine-SDS緩沖液

500 ml(干粉)

常溫

配制后4℃

8

TP050-01

2×Tricine上樣緩沖液(變性,還原)

1 ml

-20

產(chǎn)品簡介:

該產(chǎn)品含有多肽電泳全套試劑,可以用來檢測2.5-20 kD的多肽大小。本試劑盒可配制至少25塊常規(guī)大?。?×10cm),厚度1 mm的PAGE膠。該產(chǎn)品具有以下特點(diǎn):

1 分辨率高:凝膠緩沖液獨(dú)特配方,可以有效分離2.5-5 kD多肽;

2 使用方便:配制凝膠時(shí)只需1:1混合濃縮膠或分離膠溶液,不用計(jì)算;

3 易于上樣:紅色濃縮膠,易于觀察加樣孔,上樣方便。

貯存、運(yùn)輸及效期:

按照標(biāo)簽溫度貯存;常溫運(yùn)輸;有效期一年。

使用說明:

. 10%APS溶液配制:

10% APS為固體粉末,使用前加入5 ml雙蒸水溶解即配制成10% APS溶液,將溶液分裝后置于-20℃保存,通常一年內(nèi)有效。該溶液在4℃條件下可以穩(wěn)定保存兩周。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長,應(yīng)考慮更換使用-20℃保存的10% APS溶液。

. 制膠:

1. 配制分離膠:

1.1按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。                    表1 (一塊1 mmmini膠用量)*

 

分離膠

濃縮膠

 

18T /5 ml

5T /1.5 ml

濃縮膠緩沖液

/

0.75 ml

分離膠緩沖液

2.5 ml

/

濃縮膠用聚合溶液

/

0.75 ml

分離膠用聚合溶液

2.5 ml

/

10%APS溶液

~50 μl

~15 μl

TEMED

~5 μl

1.5 μl

注: * 如非必須,不要使用厚度1.5 mm的凝膠,盡量使用厚度1 mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時(shí)間。

1.2 在玻璃板中迅速灌入適量分離膠溶液,使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5 cm即可。注:此溶液為過量,請勿全部注入。

1.3 然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

1.4 靜置10-30分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會延長??梢愿鶕?jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。分離膠25℃條件下,約20分鐘可以聚合。

2. 配制濃縮膠:

去除覆蓋在分離膠上的乙醇層,用濾紙將殘留的乙醇吸去。

2.1 按照表一將不同成分加入到小燒杯中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

2.2 將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

2.3 靜置30-50分鐘待凝膠聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會延長??梢愿鶕?jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件下,約40分鐘可以聚合。

. 電泳:

3.1 變性電泳緩沖液和樣品配制:

3.1.1 10×Tris-Tricine- SDS緩沖液配制:

將10×Tris-Tricine -SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干凈的燒杯中,加入500 ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調(diào)節(jié)pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine -SDS緩沖液。

注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。

3.1.2 變性樣品處理:

        待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液(變性,還原)[Cat No:TP050]等體積混合,95處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液,根據(jù)說明書上樣(預(yù)染Marker不能加熱處理,非預(yù)染Marker上樣前一般要95處理5分鐘)。

3.2 變性電泳緩沖液配制和樣品配制:

3.2.1 10×Tris-Tricine緩沖液配制:

將10×Tris-Tricine緩沖液(10×TT)粉末[Cat No:CB020P](試劑盒不提供)置于一干凈的燒杯中,加入500 ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調(diào)節(jié)pH,即配成500 ml 10×TT緩沖液。超純水稀釋10倍配成1×Tris-Tricine緩沖液。

注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TT緩沖液。

3.2.2 非變性樣品處理:

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液(非變性,非還原)[Cat No:TP070] (試劑盒不提供)等體積混合,不要加熱,直接上樣。

3.3 電泳:

將電泳槽的內(nèi)槽加滿電泳緩沖液,輕柔拔出梳子,用1 ml移液器將梳孔吹洗干凈,將Marker或蛋白樣品加入點(diǎn)樣孔,穩(wěn)壓電泳(表2),至藍(lán)色考馬斯亮藍(lán)指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。整個(gè)電泳過程大約需要2.5-3個(gè)小時(shí)。

2 多肽電泳條件

恒電壓

150 V

起始電流

60-75 mA/板膠

結(jié)束電流

15-25 mA/板膠

電泳時(shí)間

2.5-3小時(shí)

注:穩(wěn)壓電泳,電流不用調(diào)節(jié),記錄電流數(shù)值在推薦范圍內(nèi),電泳過程中電流會逐漸降低。

 

. 染色:

凝膠可以使用常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色液和脫色液進(jìn)行染色和觀察。需要注意的是,常規(guī)染色和脫色方法需要較長時(shí)間,小肽由于長度較短,和凝膠結(jié)合不緊密,長時(shí)間在溶液中浸泡容易從凝膠中脫離。常規(guī)染色和脫色時(shí)效果不好或考慮其毒性,請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液(Cat No:RTD6202),該產(chǎn)品除具有染色快,無毒,靈敏性高等特點(diǎn)外,還能對小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離,是常規(guī)染色液的理想替代品。


 實(shí)驗(yàn)示例:


 
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