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Western無蛋白快速封閉液

Western無蛋白快速封閉液

產(chǎn)品編號:PF1070-100ml

產(chǎn)品規(guī)格:100ml

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價格 ¥60


Western無蛋白快速封閉液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

保存條件

PF1070-100ml

Western無蛋白快速封閉液

100 ml

2-8

PF1070-500ml

Western無蛋白快速封閉液

500 ml

2-8

說明書

一份

產(chǎn)品簡介:

本產(chǎn)品專為快速高效封閉Western Blot 轉(zhuǎn)印膜而設(shè)計,采用無蛋白配方,避免抗體與封閉劑的非特異結(jié)合,最大程度地降低了背景。同時,本封閉劑無內(nèi)源的磷酸化蛋白及生物素,對磷酸化特異抗體及生物素檢測也不會產(chǎn)生干擾。本封閉劑不與蛋白產(chǎn)生非特異性結(jié)合,因而只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,大大提高了抗體檢測靈敏度。實驗表明,本封閉劑對許多抗體都有不同程度的信號增強作用。然而這種信號增強作用因抗體而異,對某一特定抗體,并不一定具有確定的信號增強作用。

注意: 沒有任何一種封閉劑能適合所有抗原和抗體的檢測系統(tǒng)。如出現(xiàn)本試劑不適合的抗體,請?zhí)鎿Q使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。

貯存:

  2-8貯存,有效期一年。

注意事項:

1. 快速高效:10-60 min內(nèi)完成封閉;只結(jié)合封閉轉(zhuǎn)印膜而不結(jié)合蛋白,因此不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,與傳統(tǒng)的脫脂奶粉和BSA 封閉相比信噪比更高;

2. 方便快捷:無需稀釋,即取即用;

3. 性能可靠:無蛋白配方,與抗體無交叉反應(yīng);

4. 應(yīng)用范圍廣:無磷酸化蛋白,無生物素,尤其適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統(tǒng);

5. 節(jié)省抗體:使用本封閉劑后,所需的最適抗體濃度低于常規(guī)使用濃度,可大大節(jié)省抗體使用量。

6. 與PVDF膜相比,NC膜需要更長時間的封閉。

使用說明:

1. 本產(chǎn)品無需稀釋,開蓋即用。

2. 完成轉(zhuǎn)膜后,使用TBST漂洗轉(zhuǎn)印膜3次,每次5分鐘;


3. 將轉(zhuǎn)印膜放入到雜交孵育盒中,加入10-20 ml 無蛋白快速封閉液完全覆蓋轉(zhuǎn)印膜,置于搖床輕輕搖動,參考下表確定封閉時間:

膜類型

推薦封閉時間

反應(yīng)溫度

PVDF

10-20分鐘

常溫 25

NC

40-60 分鐘

常溫25

注意:使用本產(chǎn)品,PVDF膜和NC膜使用推薦封閉時間,經(jīng)多種抗體的測試封閉效果顯著優(yōu)于常規(guī)的BSA封閉1 h。對于一些背景非常高的抗體,可以嘗試延長封閉時間。如有特殊需要,也可4℃封閉過夜。

4.  封閉結(jié)束后棄去封閉液,進行Western Blot后續(xù)操作。


● 實驗示例:


Jurkat細(xì)胞總蛋白GAPDH檢測

電泳條件:200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

轉(zhuǎn)膜條件:NC膜,1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液(Cat:RT5020)

恒流400 mA 35 min 65-59 V

封閉:無蛋白封閉液(Cat:PF1070) RT 60 min

一抗:兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 過夜4℃孵育

二抗:羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000  RT 60min

ECL發(fā)光:RealECL發(fā)光液(Cat:EC2520 ) 10秒曝光



植物葉綠體LHCa3檢測

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 無蛋白封閉液(Cat:PF1070) RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3(Cat:RGL2080) 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min



 
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