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氨芐青霉素溶液(100mg/ml)

氨芐青霉素溶液(100mg/ml)

產(chǎn)品編號:AA0120S-02

產(chǎn)品規(guī)格:10×1ml

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數(shù)量
價格 ¥150

氨芐青霉素溶液(100 mg/ml)

產(chǎn)品包裝:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品包裝

說明書

AA0120S-02

氨芐青霉素溶液(100mg/ml)

10×1 ml

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產(chǎn)品簡介:

氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)又稱安比西林、氨芐西林,是一種β-內(nèi)酰胺類抗生素,干擾肽聚糖的交聯(lián)從而抑制細菌細胞壁的合成。氨芐青霉素時常被用于分子生物學實驗研究中,如用于配制含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基或LB平板等。氨芐青霉素溶液已經(jīng)0.22 μm過濾除菌,可以直接添加到培養(yǎng)基中。一般推薦工作濃度為50~100 μg/ml。

本氨芐青霉素溶液已經(jīng)優(yōu)化溶解液,可以保持溶液在-20℃下基本不結(jié)冰,方便使用的同時降低了反復凍融對抗性的影響。

貯存、效期及運輸:

-20℃保存;有效期6個月;濕冰運輸。

使用方法:

1. 取出-20℃保存的氨芐青霉素溶液,常溫徹底溶化,完全混勻。

注:溶液在-20℃下基本為流動性溶液,如有冰晶形成,常溫徹底溶化后使用。

2.一般Amp在LB中終濃度為50~100 μg/ml??梢源篌w按照1/1000 LB體積加入100 mg/ml Amp溶液,如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。

注:氨芐青霉素對高溫敏感,要等待LB瓊脂溫度低于55℃后再加入氨芐溶液。

  3. 在所有的細菌篩選抗生素中,氨芐青霉素的穩(wěn)定性最為不佳,參照下表確定使用的效期:

類型

貯存溫度

抗性維持時間

備注

LB氨芐平板

4-8

2

平板要Parafilm封口,避免平板水分蒸發(fā)干裂

氨芐溶液(100mg/ml

-20

6個月

盡量降低溶液反復凍融次數(shù)

氨芐溶液(100mg/ml

4-8

2

盡量避免溶液貯存在4-8

LB液體搖菌

37℃培養(yǎng)

2

搖菌時,OD值控制在3以內(nèi)

注意事項:

1. 衛(wèi)星菌落:LB氨芐瓊脂平板培養(yǎng)時間過長時,會發(fā)現(xiàn)一個大菌落的周圍會出現(xiàn)一些小的菌落,這些小的菌落稱為衛(wèi)星菌落(satellite colony)。原因:氨芐青霉素可以被β-內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)水解。平板上的細菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶分泌到細胞外,隨著細菌的生長,培養(yǎng)基中的β-內(nèi)酰胺酶會不斷增加,這時培養(yǎng)基內(nèi)氨芐青霉素會被降解,因此沒有氨芐抗性質(zhì)粒的小菌群則環(huán)繞大菌落生長,產(chǎn)生衛(wèi)星菌落。衛(wèi)星菌落沒有氨芐抗性,挑取單菌落時,不要挑取衛(wèi)星菌落培養(yǎng)。

2. 質(zhì)粒丟失:氨芐抗性細菌在傳代的時候,會出現(xiàn)質(zhì)粒丟失,傳代次數(shù)越多,質(zhì)粒丟失的可能性越大。對于其他抗生素如氯霉素,細菌如果丟失了部分帶抗性的質(zhì)粒,該菌在含有氯霉素的培養(yǎng)基中是不會生長的。但是對于氨芐則不然,在液體培養(yǎng)液中,培養(yǎng)時間過長的培養(yǎng)基中氨芐的濃度會降低,丟失了一部分質(zhì)粒的細菌也可以在其中生長。因此對于使用氨芐作為抗性標記的克隆,每隔一段時間需要檢查細菌質(zhì)粒丟失情況。比較直觀的辦法就是通過SDS-PAGE,如果發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的表達水平降低了,很大可能是因為質(zhì)粒丟失了,此時需要重新轉(zhuǎn)化重組載體。

3. 不要使用配制時間過長或超過效期的氨芐溶液。氨芐存儲時間過長或者保存不當,很有可能發(fā)生降解。

4. 液體培養(yǎng)建議:在液體培養(yǎng)中,不要讓細菌長到過飽和,在LB培養(yǎng)基中,OD600絕對不能超過3。如果是擴大培養(yǎng),可以先把初始培養(yǎng)液內(nèi)細菌沉淀,然后利用新鮮的培養(yǎng)液重懸,再進行下一步的培養(yǎng),這樣可以大大減少β-內(nèi)酰胺酶在液體中的含量。


 
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