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單鏈DNA Marker 15-120nt 預(yù)混型

單鏈DNA Marker 15-120nt 預(yù)混型

產(chǎn)品編號:RTM506

產(chǎn)品規(guī)格:10次

數(shù)量
價格 ¥500

單鏈DNA Marker 15-120nt 預(yù)混型                          

貨號

名稱

規(guī)格

RTM506

單鏈DNA Marker15-120 nt

10

 

● 產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

貯存

RTM506-01

單鏈DNA Marker15-120 nt

50 μl

-20℃

DL080-01

2×TBE尿素上樣緩沖液

1 ml

-20℃

● 產(chǎn)品簡介:

單鏈DNA  Marker由6條不同長度的單鏈DNA分子混合而成,6條帶的大小為15,40,60,80,100,120 nt,80 nt 濃度為0.4 μg/μl,其余條帶濃度為0.2 μg/μl。該Marker適用于跑尿素變性膠,電泳后使用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5102),核酸快速高靈敏度染色試劑盒(Cat:RTS5101)或RealSafe類核酸染料染色均可以得到清晰的條帶分離效果。

樣品保存在1×TBE尿素上樣緩沖液中,上樣方便。以每次上樣5 μl計算,該單鏈DNA Marker可以使用大約10次。

●  保存條件和運輸:

-20℃貯存,有效期24個月;濕冰運輸。

● 使用方法:

注:以下使用方法均以8×10cm凝膠 1.0mm示例,其他規(guī)格凝膠請適當調(diào)整。

. 凝膠制備:

1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒(Cat:RTE4102))或按照以下程序制膠:

表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml,適用于厚度1.0 mm小板膠)

單鏈DNA長度

最佳凝膠濃度

尿素(克)

40%PAA

29:1

5×TBE

補水到總體積

10%APS

TEMED

200-1000 nt

5%

2.1

0.625 ml

1 ml

5 ml

50 μl

5 μl

50-400 nt

8%

2.1

1 ml

1 ml

5 ml

50 μl

5 μl

30-300 nt

10%

2.1

1.25 ml

1 ml

5 ml

50 μl

5 μl

10-150 nt

15%

2.1

1.875 ml

1 ml

5 ml

50 μl

5 μl

最后加入10%APS和TEMD后,立即混勻。

1.2在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

1.3靜置10-20分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面后,說明凝膠已聚合。

注:凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長??梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

1.4去除覆蓋在分離膠上的水層;按照表二將不同體積成分在一個小燒杯中混合;最后加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml,適用于1.0mm厚度膠)

各組份體積(ml

凝膠濃度

尿素

40%PAA29:1

5×TBE

滅菌水

10%APS

TEMED

4%

0.84

0.2 ml

0.4 ml

補水至體積2 ml

20 μl

2 μl

1.5將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端;將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

1.6靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。

注:凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時,聚合較快;冬天氣溫低時,聚合時間會延長??梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

. 樣品制備:

2.1 取適量體積單鏈DNA Marker樣品,70℃處理5分鐘,冰浴制冷后待上樣;待測樣品序與2×TBE尿素上樣緩沖液等體積混合后70℃處理5分鐘,冰浴制冷后待上樣。

.電泳:

3.1. 預(yù)電泳(可選):電泳槽內(nèi)外加入適量1×TBE緩沖液穩(wěn)壓200 V預(yù)電泳30分鐘。電泳結(jié)束后,1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次,去除殘余的尿素。

3.2.上樣:根據(jù)梳齒確定Marker上樣量, 一般是10齒1mm厚梳子上樣5 μl,15齒1mm厚梳子上樣3 μl。

3.3. 連接電源線,打開電源開關(guān),按照以下條件電泳。

 

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時間

適用條件

推薦電壓

200V

15-20 mA/板膠

10-15 mA/板膠

60+ min

最佳電壓,最優(yōu)的分辨率

3.4. 等待上樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到凝膠底部時終止電泳,取出凝膠進行后續(xù)實驗。

變性膠濃度

溴酚藍

二甲苯菁

5%

35 nt

130 nt

8%

19 nt

75 nt

10%

15 nt

55 nt

15%

8 nt

42 nt

四.染色:

用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE電泳染色試劑盒(Cat:RTS5102)或核酸快速銀染試劑盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的條帶分離效果。

注:如果使用核酸染料染色,RealSafe Red(貨號:GR002)或RealSafe All(貨號:GR004)核酸染料結(jié)合單鏈核酸效果最佳,強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed,Goldview,EB等染色效果不好。

● 電泳示例:

1. 使用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)染色:



2. 使用核酸快速高靈敏度染色試劑盒(貨號:RTS5101)染色




 
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