10bp DNA ladder

● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：

RTM443          50次 (250 μl)    

● 產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是由8條帶狀雙鏈DNA條帶組成的精準(zhǔn)定量Marker，8條帶的大小分別為10，15，20，25，30，40，50，100bp。其中25 bp條帶為加亮帶，含量為100 ng/5 μl，其余條帶濃度為50ng/5μl。本產(chǎn)品為雙鏈DNA Marker，適用于非變性的PAGE電泳，不適用于尿素PAGE電泳。由于片段長(zhǎng)度很短，不建議用瓊脂糖凝膠電泳分離。

● 儲(chǔ)存、效期及運(yùn)輸條件：

  -20℃ 貯存;有效期3年；濕冰運(yùn)輸。

● 使用方法：

一、 TBE-PAGE凝膠分離：

1、制備凝膠步驟：

1.1參照凝膠模具說(shuō)明書(shū)，裝配好凝膠模具。

1.2按照表一將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；最后加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

   注：10 bp DNA ladder 適用于配制20%TBE-PAGE膠。

1.3在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無(wú)水乙醇，使凝膠表面保持平整。

1.4靜置10-20分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說(shuō)明凝膠已聚合

表一 TBE-PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于1mm厚度小板膠)

1.5去除覆蓋在分離膠上的乙醇；按照表二將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；最后加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

表二 TBE-PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml，適用于1mm厚度小板膠)

1.6將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端；將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

1.7靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。可以根據(jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

2、電泳：

2.1 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入1×TBE電泳液，1 ml吸頭沖洗加樣孔1-2次。

2.2 取待測(cè)樣品，加入相應(yīng)體積6×Native PAGE DNA上樣緩沖液，如5 μl樣品加1 μl 上樣緩沖液，短暫離心后取5-10 μl上樣。 10 bp DNA ladder  1 mm厚10齒梳子上樣5 μl，其余梳齒和厚度凝膠適量調(diào)整上樣量。

2.3 連接電源線(xiàn)，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)。200 V穩(wěn)壓電泳，至溴酚藍(lán)指示前沿距離玻璃下沿1 cm時(shí)結(jié)束電泳。

          20%T3.3C TBE-PAGE

3、染色：

3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。

3.2 染色液配制：

  TBE-PAGE膠可以使用EB或RealSafe類(lèi)染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（貨號(hào)：GR002）進(jìn)行染色。即用型染色液配制：

3.3染色和觀察：

  凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm染色30 分鐘。紫外光下觀察。