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20bp DNA ladder(20-500 bp)

20bp DNA ladder(20-500 bp)

產(chǎn)品編號(hào):RTM441

產(chǎn)品規(guī)格:50次

數(shù)量
價(jià)格 ¥500

20bp DNA ladder

● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格:

RTM441          50次 (250 μl)    

● 產(chǎn)品組成:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

RTM441-01

20bp DNA ladder

50次(250 μl

DL070

6×Native-PAGE DNA上樣緩沖液

1 ml

DL020

6×DualColor DNA loading buffer (雙染料)

1 ml

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本產(chǎn)品是由13條帶狀雙鏈DNA條帶組成的精準(zhǔn)定量Marker,適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中DNA條帶大小和含量的分析。13條帶的大小分別為20,40,60,80,100,120,140,160,180,200,300,400,500 bp。其中100bp和200bp條帶為加亮帶,含量為100ng/5μl,其余條帶濃度為50ng/5μl。

本產(chǎn)品為雙鏈DNA Marker,適用于非變性的PAGE電泳和瓊脂糖凝膠電泳,不適用于尿素PAGE電泳。由于片段較小,如使用瓊脂糖分離,建議使用高分辨率瓊脂糖凝膠電泳分離。

按照每次上樣5 μl計(jì)算,該產(chǎn)品可以使用50次。

● 儲(chǔ)存條件:

 -20 貯存,有效期3年。

● 使用方法:

一、 TBE-PAGE凝膠分離:

1、制備凝膠步驟:

1.1參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

1.2按照表一將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合;最后加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

   注:20bp DNA ladder 適用于配制20%TBE-PAGE膠。

1.3在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇,使凝膠表面保持平整。

1.4靜置10-20分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,說明凝膠已聚合

表一 TBE-PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml,適用于1mm厚度小板膠)

各組份體積(ml

最佳DNA分離范圍

凝膠濃度

滅菌水

30%PAA291

5×TBE

10%APS

TEMED

70-450 bp

6%

3

1.0

1.0

0.05

0.005

60-460 bp

8%

2.66

1.34

1.0

0.05

0.005

50-300 bp

10%

2.33

1.67

1.0

0.05

0.005

40-200 bp

12%

2

2.0

1.0

0.05

0.005

25-150 bp

15%

0.5

2.5

1.0

0.05

0.005

5-100 bp

20%

0.66

3.34

1.0

0.05

0.005

1.5去除覆蓋在分離膠上的乙醇;按照表二將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合;最后加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

表二 TBE-PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml,適用于1mm厚度小板膠)

各組份體積(ml

凝膠濃度

滅菌水

30%PAA291

5×TBE

10%APS

TEMED

4%

1.0

0.2

0.3

0.02

0.002

1.6將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端;將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

1.7靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。可以根據(jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

2、電泳:

2.1 將凝膠板固定在電泳裝置上,往上槽和下槽中加入1×TBE電泳液,1 ml吸頭沖洗加樣孔1-2次。

2.2 取待測(cè)樣品,加入相應(yīng)體積6×Native PAGE DNA上樣緩沖液,如5 μl樣品加1 μl 上樣緩沖液,短暫離心后取5-10 μl上樣。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齒梳子上樣5 μl,其余梳齒和厚度凝膠適量調(diào)整上樣量。

2.3 連接電源線,打開電源開關(guān)。200V穩(wěn)壓電泳。至二甲苯菁指示前沿到達(dá)凝膠三分之二位置時(shí)結(jié)束電泳(此時(shí)溴酚藍(lán)指示前沿已經(jīng)跑出凝膠,不可見)。

TBE-PAGE電泳

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時(shí)間

200 V

20-25 mA/板膠

10-15 mA/板膠

70+min



3、染色:

3.1 漂洗:玻璃板上拆下凝膠后,適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。

3.2 染色液配制:

  TBE-PAGE膠可以使用EBRealSafe類染料后染染色,以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號(hào):GR002)進(jìn)行染色。即用型染色液配制:

 

即用型RealSafe核酸染色液

 

100 ml

1×TBE

100 ml

RealSafe Red核酸染料

20 μl

3.3染色和觀察:

  凝膠浸泡于即用型染色液中,常溫避光搖床40-60 rpm染色30 分鐘。紫外光下觀察。

二、 瓊脂糖凝膠分離:

1. 瓊脂糖凝膠制備:

  由于片段較小,建議選用高分辨率瓊脂糖(貨號(hào)AR1036)制膠。

以下步驟以制備50 ml 3%凝膠為例:

稱取1.5 g瓊脂糖于玻璃三角瓶中,加入50 ml 1×TAE,5 μl RealSafe Red核酸染料或其他核酸染料(如EB,GoldView),混勻,蓋好瓶蓋,微波爐中火加熱至沸騰,輕搖混勻,重復(fù)1-2次至瓊脂糖完全溶解,無可見顆粒。倒入制膠容器中,插好梳子,常溫凝固30-50分鐘至凝膠完全凝固。

2. 電泳:

取待測(cè)樣品,加入相應(yīng)體積6×DualColor DNA loading buffer,如10 μl樣品加2 μl 上樣緩沖液,短暫離心后取5-10 μl上樣。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齒梳子上樣5 μl,其余梳齒和厚度凝膠適量調(diào)整上樣量。

建議電泳條件:凝膠濃度為3%,電泳電壓8-10 v/cm(單位電壓指電泳槽陰陽極之間的距離電壓,如陰極陽極之間的距離為20 cm,可以用160-200 V電壓進(jìn)行穩(wěn)壓電泳),待溴酚藍(lán)指示前沿距離凝膠末端2 cm時(shí)終止電泳,電泳時(shí)間35-40分鐘。

注:3% 瓊脂糖TAE電泳中,溴酚藍(lán)大小約為20bp,二甲苯菁大小約200bp。

3. 紫外燈下觀察條帶。

注:使用EB或Goldview染料時(shí),由于染料本身帶正電荷較多,隨著電泳時(shí)間的延長(zhǎng),染料會(huì)向陰極聚集,導(dǎo)致小片段核酸結(jié)合的染料含量降低,會(huì)出現(xiàn)小片段的DNA片段紫外燈下亮度變?nèi)趸虿豢梢?。此時(shí)可以將膠浸泡于含有染料的1×TAE緩沖液中染色15-20分鐘即可看到小片段。

4. 實(shí)驗(yàn)示例:



 


使用RTM441 20bp DNA ladder產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:

1. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Marker: RTM441,20bp DNA ladder

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution:School of Public Health, Hebei Medical University

Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340

 

 


 
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