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Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(變性電泳,含預(yù)制膠)

Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(變性電泳,含預(yù)制膠)

產(chǎn)品編號(hào):RTD6155

產(chǎn)品規(guī)格:10次

數(shù)量
價(jià)格 ¥800

Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(變性電泳)

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

RTD6155

Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒(變性電泳)

10


產(chǎn)品組成:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

保存

RTD6154-0308

3-8% RealPAGE Tris醋酸預(yù)制膠(U型板,通用型,12孔)

10/

4

RTD6155-01

20×樣品還原劑

1 ml

4

(配制后-20℃貯存)

TA1510

400×抗氧化劑

15 ml

4

(配制后-20℃貯存)

TA050

10×Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液(變性電泳,溶液型)

500 ml

RT

PL112-01

5×MonoClolor蛋白上樣緩沖液 (變性,非還原)

1 ml

-20

RTD6202

FastBlue蛋白快速染色液

500 ml

RT

TA5030P

10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),粉末型)

500 ml

RT

說(shuō)明書

一份

-

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電泳適合于分離高分子量蛋白,可以有效分離50-500 kD范圍內(nèi)蛋白;電泳體系呈中性,抑制半胱氨酸的二次氧化,防止二硫鍵在凝膠中交聯(lián);在變性還原電泳中,電泳緩沖體系中加入抗氧化劑,整個(gè)電泳過(guò)程都在還原條件下進(jìn)行,有效防止二硫鍵的形成。

本公司提供的Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒包含預(yù)制膠、蛋白上樣、蛋白電泳、染色及轉(zhuǎn)膜所需的全部試劑。試劑盒配套的預(yù)制膠為梯度凝膠,濃度為3-8%,厚度為1.1 mm,12齒,每個(gè)泳道可以上樣最大30 μl樣品。

本試劑盒用于蛋白變性電泳,本試劑盒可以使用10次。

貯存及運(yùn)輸:

   按照標(biāo)簽溫度貯存;試劑盒常溫運(yùn)輸。

使用說(shuō)明:

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:

1.1 20×樣品還原劑為干粉,4℃貯存。用前加入1ml超純水震蕩徹底溶解后使用,已經(jīng)溶解的20×樣品還原劑-20℃貯存。

1.2 400×抗氧化劑為干粉,常溫貯存。用前加入15 ml超純水震蕩徹底溶解后使用,已經(jīng)溶解的400×抗氧化劑-20℃貯存。

2. 電泳:


注:伯樂(lè)Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請(qǐng)確保密封條的安裝方向(如圖)。

六一其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。


2.2 準(zhǔn)備1×電泳緩沖液:

總體積

1000 ml

10×Tris-醋酸-SDS電泳緩沖液

100 ml

超純水

900 ml

2.2.1 外槽緩沖液:取適量體積1×電泳緩沖液用于外槽緩沖液。

2.2.2 內(nèi)槽緩沖液:對(duì)于還原樣品電泳,200 ml 1×電泳緩沖液中加0.5 ml 400×抗氧化劑,混合均勻后用于內(nèi)槽緩沖液。對(duì)于非還原樣品電泳,直接在內(nèi)槽中加入1×電泳緩沖液,不要添加400×抗氧化劑。

2.3準(zhǔn)備上樣樣品:

注:表格以配制10 μl樣品為例,其他體積按照比例調(diào)整。

 

總體積10 μl

組份

非還原樣品

還原樣品

蛋白樣品

x μl

x μl

5×MonoClolor蛋白上樣緩沖液 (變性,非還原)

2 μl

2 μl

20×樣品還原劑

-

0.5 μl

超純水

補(bǔ)至10 μl

 

95℃ 10分鐘

2.4電泳過(guò)程;

在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次;隨后在電泳槽外槽加入適量的1×電泳緩沖液。上樣,電泳。

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時(shí)間

150V

40-55 mA/板膠

25-40 mA/板膠

60+min

注:冰浴電泳(可選)

3. 染色:

3.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量FastBlue蛋白染色液(以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適),搖床常溫?fù)u動(dòng),條帶5-10分鐘即可見(蛋白含量高于1 μg條帶)。

3.2 搖床常溫繼續(xù)搖動(dòng)15-30分鐘至條帶清晰可見。

3.3 加入適量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘至背景干凈。

3.4 觀察保存結(jié)果。

4. 轉(zhuǎn)膜:

4.1 轉(zhuǎn)印膜選擇:

Tris-醋酸凝膠轉(zhuǎn)膜可以使用NC膜和PVDF膜,需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤(rùn)濕活化。

4.2 10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(溶液型)配制:

將10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(濕轉(zhuǎn),粉末型)粉末溶解于500 ml超純水中,即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(溶液型),不要調(diào)節(jié)pH,pH~7.2。

4.3 準(zhǔn)備1×轉(zhuǎn)膜緩沖液:

 

 

即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液 配制量 1

 

10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液(溶液型)

100 ml

 

 

變性蛋白

非變性蛋白

20 kD蛋白

無(wú)水甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白

無(wú)水甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白

無(wú)水甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超純水

定容至1升,不要調(diào)節(jié)pHpH~7.2


注:甲醇和SDS在轉(zhuǎn)膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結(jié)合在膜上,而SDS讓蛋白更加離開膜。因此對(duì)大蛋白轉(zhuǎn)膜來(lái)說(shuō),多加SDS,少加甲醇;而對(duì)小蛋白轉(zhuǎn)膜,多加甲醇,少加SDS。

4.4 轉(zhuǎn)膜條件:

以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考,客戶針對(duì)自己的目的蛋白,最好經(jīng)過(guò)1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后,確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

膜孔徑

蛋白大小

穩(wěn)流

建議時(shí)間

降溫措施

0.22 μm

低于20 kD

200 mA

~30分鐘

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分鐘

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分鐘

需要

0.45 μm

高于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小時(shí)

需要

 實(shí)驗(yàn)示例:


 
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