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非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

產(chǎn)品編號:RTD6130

產(chǎn)品規(guī)格:50次

數(shù)量
價(jià)格 ¥300

非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6130

Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

保存條件

AC2913-01

30%PAA(29:1)

100 ml

4

RTD6130-02

4×分離膠緩沖液 pH8.8

100 ml

4℃

RTD6130-03

4×濃縮膠緩沖液 pH6.8

50 ml

4℃

AP020P

APS(干粉)

0.5 g

RT

TA0761-01

TEMED

0.5 ml

4,避光

PL111

5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液

1 ml

-20

TG130P

5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(干粉)

1L

RT

產(chǎn)品簡介:

本公司提供的非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒包含凝膠制備及電泳所需的全部試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制30-50塊常規(guī)大小的非變性PAGE膠。

特別說明:由于本系統(tǒng)采用非連續(xù)Laemmli凝膠系統(tǒng),分離膠pH為8.8,因此要求待分離的蛋白等電點(diǎn)pI≤7.0,這樣蛋白在凝膠系統(tǒng)內(nèi)帶負(fù)電荷,在凝膠電泳中才能正常向正極泳動(dòng)。如果待分離的蛋白等電點(diǎn)pI>7.0,請選擇堿性電泳凝膠系統(tǒng)分離(貨號RTD6131)。

使用說明:

配制分離膠(各試劑使用量請參考表二)

根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度(表一),再按照下面的分離膠配方表(表二)配制非變性PAGE的分離膠(即下層膠)。

表一 不同濃度的PAGE分離膠的最佳分離范圍:

SDS-PAGE分離膠濃度

最佳分離范圍

6%

50-150kD

8%

30-90kD

10%

20-80kD

12%

12-60kD

15%

10-40kD

10% APS配制-5 ml

將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃?zhèn)浯?,每次取一管使用?0% APS應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長,應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10% APS。

制備分離膠步驟:

1.根據(jù)下表,將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合;先后加入TEMED和10%APS,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡


2.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

3.靜置15-20分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,說明凝膠已聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長??梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

濃縮膠制備:


1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

2.按照表一將不同成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合;先后加入TEMED和10%過硫酸銨,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

3.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

4.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

5.靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。

注:凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí),聚合較快;冬天氣溫低時(shí),聚合時(shí)間會(huì)延長??梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

三 電泳:

凝膠凝固好后,根據(jù)以下配方準(zhǔn)備電泳緩沖液。

5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(不含SDS)的配制-1 L:將一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調(diào)節(jié)pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣,電泳,一般是濃縮膠80V,分離膠120V恒壓,等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后,結(jié)束電泳,染色或者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。


實(shí)驗(yàn)示例



RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒發(fā)表文章

 

1. [2021 IF=6.95] A teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment and anti-bacterial immunity.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒

Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.

Journal: International Journal of Biological Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.

Institution School of Ocean, Yantai University, Yantai, China

Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151

 

2. [IF=17.69 2021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvate in an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system.

Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒; PL111 5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液; RTD6142 高分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker II(45-669 kD)

Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng.

Journal: Nature Communications. 2023,14:2772.

Institution Westlake University

Paper link http://www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w

 


 


 
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