国产亚洲美女精品久久久2020_无码人妻精品一区二区三区久久久_中文无码在线观看高清免费_精品无人乱码一区二区三区

您好,歡迎光臨中科瑞泰!

免費(fèi)咨詢電話:
400-699-0631

首頁(yè) > 蛋白生物學(xué) > 蛋白提取純化 > 裂解液

RIPA裂解液(強(qiáng),不含抑制劑,不含螯合劑)

RIPA裂解液(強(qiáng),不含抑制劑,不含螯合劑)

產(chǎn)品編號(hào):RL0120F

產(chǎn)品規(guī)格:100ml

數(shù)量
價(jià)格 ¥150

RIPA裂解液(強(qiáng),不含抑制劑,不含螯合劑)

產(chǎn)品包裝:

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

說(shuō)明書(shū)

RL0120F

RIPA裂解液(強(qiáng),不含抑制劑,不含螯合劑)

100 ml

1

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

RIPA裂解液(RIPA  Lysis  Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA的本意是Radio  Immunoprecipitation  Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。該RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50 mM Tris (pH 7.4),150 mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,不含蛋白酶抑制劑,不含磷酸酶抑制劑,不含螯合劑如EDTA或EGTA,可適用于明膠酶譜實(shí)驗(yàn)的蛋白提取。使用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要添加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑以及EDTA或EGTA。

用該RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。

保存、效期及運(yùn)輸:

-20℃保存,有效期一年,濕冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng):

1.為取得最佳的使用效果,盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。需自備PMSF。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2. RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬常見(jiàn)現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)與基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

使用說(shuō)明:

1.  準(zhǔn)備RIPA裂解液:

融解RIPA裂解液,混勻;取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入1/100體積的100 mM PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。

注:進(jìn)行明膠酶譜實(shí)驗(yàn)提取蛋白樣品時(shí),不要添加EDTAEGTA,以免螯合掉MMP活性需要的二價(jià)陽(yáng)離子;蛋白酶抑制劑也要選擇性添加,不要添加金屬蛋白酶抑制劑,可以添加PMSF(絲氨酸蛋白酶抑制劑)。

2. 細(xì)胞蛋白提?。?/b>

2.1 貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,加入適量1×PBS,輕柔漂洗一遍,不要擾動(dòng)貼壁細(xì)胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液,移液器吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,冰上裂解細(xì)胞5分鐘,用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞收集于1.5 ml離心管中,冰上繼續(xù)裂解15分鐘,間歇混勻。

培養(yǎng)板規(guī)格/培養(yǎng)皿表面積

細(xì)胞量

RIPA推薦使用量

100 mm培養(yǎng)皿

1.5×107

0.5-1 ml

60 mm培養(yǎng)皿

5×106

0.25-0.5 ml

35 mm培養(yǎng)皿

2×106

0.2-0.4 ml

6孔板

2.5×106

100-200 μl

24孔板

5×105

100-150 μl

96孔板

1×105

50-100 μl

2.2 懸浮細(xì)胞:450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞;用適量1×PBS重懸細(xì)胞,450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞;重復(fù)漂洗細(xì)胞一次;按照細(xì)胞沉淀體積(PCV)20 μl加入200 μl RIPA的比例加入RIPA,混勻細(xì)胞沉淀,冰浴處理15分鐘,間歇混勻。

注:2×106 Jurkat細(xì)胞,其細(xì)胞沉淀體積(PCM,Packed Cell Volume)大約為20 μl。

2.3 裂解細(xì)胞:

裂解混合物超聲波處理(超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整,建議條件為);如沒(méi)有超聲破碎儀,可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次,以徹底裂解細(xì)胞。冰浴處理15分鐘。

注:裂解中細(xì)胞會(huì)釋放出變性的核酸,呈團(tuán)狀粘稠透明樣,如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理,會(huì)導(dǎo)致裂解物非常粘稠,大大降低蛋白提取的得率和純度。

2.4 離心收集上清:

充分裂解后,4℃ 16000 g離心10分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

3. 組織樣品蛋白提?。?/b>

3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中,漂洗數(shù)次,洗凈組織血跡,用濾紙吸

干組織表面液體,將組織切成細(xì)小的碎片。

3.2 按照每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

3.3 用玻璃勻漿器冰浴勻漿5-10次,收集勻漿后的裂解混合物,超聲波處理(超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整,建議條件為);如沒(méi)有超聲破碎儀,可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次,以徹底裂解細(xì)胞。裂解物冰浴處理15分鐘。

注:裂解中細(xì)胞會(huì)釋放出變性的核酸,呈團(tuán)狀粘稠透明樣,如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理,會(huì)導(dǎo)致裂解物非常粘稠,大大降低蛋白提取的得率和純度。

3.4 充分裂解后,4℃ 16000 g離心10分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。


 
只有購(gòu)買(mǎi)過(guò)該商品的用戶才能進(jìn)行評(píng)價(jià)。[發(fā)表評(píng)價(jià)]
国产亚洲美女精品久久久2020_无码人妻精品一区二区三区久久久_中文无码在线观看高清免费_精品无人乱码一区二区三区