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Anti-GAPDH抗體 (兔多抗)

Anti-GAPDH抗體 (兔多抗)

產(chǎn)品編號(hào):RGA1240

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

數(shù)量
價(jià)格 ¥300


Anti-GAPDH抗體(兔多抗)

Anti-GAPDH Antibody(Polyclonal Antibody from Rabbit)

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

RGA1240

Anti-GAPDH抗體(兔多抗)

20 μl

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

甘油醛-3- 磷酸脫氫酶( Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) 是糖酵解

(glycolysis)過(guò)程中的關(guān)鍵酶,分子量為37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反應(yīng)。

GAPDH 作為管家基因在同種細(xì)胞或者組織中一般是恒定、高水平表達(dá)的,常用作Western Blot

實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參照。

來(lái)源

用途及稀釋比例

抗體類型

GAPDH分子量

Rabbit

WB 1:2000-5000

IHC 1:200-1000

IF 1:200-1000

多克隆抗體

36-38 kD

注:WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry; IF, Immunofluorescence

本抗體如果用于常規(guī)的Western檢測(cè),稀釋5000倍,使用5 ml抗體,至少可以檢測(cè)20次。

貯存形式:

穩(wěn)定溶液,1 mg/ml 抗體溶于PBS,50%甘油,pH7.2。

保存及運(yùn)輸條件:

-20℃保存,一年有效;避免反復(fù)凍融;濕冰運(yùn)輸。

使用說(shuō)明:

1. Western Blot雜交(ECL顯色):1:2000-5000稀釋,常溫孵育1-2 h或4℃過(guò)夜。

2. 免疫熒光(IF)和免疫組化(IHC):1:200-1000稀釋。


 實(shí)驗(yàn)示例:

 Jurkat總蛋白,細(xì)胞漿蛋白,細(xì)胞核蛋白GAPDH檢測(cè)

總蛋白提取:4×106 Jurkat細(xì)胞,2000 g 離心收集,去上清,沉淀中加入200 μl RIPA(加2 μl 100 mM PMSF),冰上裂解5分鐘,4℃ 16000 g 15 分鐘,上清即為總蛋白(TP)。

細(xì)胞漿蛋白:4×106 Jurkat細(xì)胞,2000 g 離心收集,加入400 μl細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A(加4 μl 100mM PMSF,加0.4 μl 1 M DTT),懸浮沉淀,冰浴15分鐘;加入20 μl細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B,混勻,冰上孵育1分鐘,震蕩5秒,4℃ 16000g 10分鐘,小心收集上清即為細(xì)胞漿蛋白(C-Pr),不要觸及沉淀。

細(xì)胞核蛋白提?。?/span>沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次,4℃ 16000 g 2分鐘;沉淀中加入200 μl 細(xì)胞核蛋白抽提試劑(加2 μl 100mM PMSF,加0.2 μl 1 M DTT),重懸沉淀,劇烈震蕩15秒,冰浴40分鐘,每間隔10分鐘劇烈震蕩15秒;4℃ 16000 g 5分鐘,上清即為細(xì)胞核蛋白(N-Pr)。

電泳:RTD6132-15%3.3C  200V 33-12 mA 55 min

轉(zhuǎn)膜:NC膜,1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液濕轉(zhuǎn),穩(wěn)流400 mA,電壓變化64-57 V,轉(zhuǎn)膜時(shí)間35 min

封閉:無(wú)蛋白快速封閉液RT 20 min

一抗孵育:GAPDH 羊抗兔多抗,一抗稀釋液稀釋1:2000

二抗孵育:羊抗兔IgG-HRP,二抗稀釋液稀釋1:5000

檢測(cè):ECL發(fā)光檢測(cè)



 
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