Anti-GAPDH抗體（兔多抗）
Anti-GAPDH Antibody（Polyclonal Antibody from Rabbit）
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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RGA1240
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Anti-GAPDH抗體（兔多抗）
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20 μl
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
甘油醛-3- 磷酸脫氫酶（
Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH） 是糖酵解
（glycolysis）過(guò)程中的關(guān)鍵酶，分子量為37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反應(yīng)。
GAPDH 作為管家基因在同種細(xì)胞或者組織中一般是恒定、高水平表達(dá)的，常用作Western Blot
實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參照。
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來(lái)源
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用途及稀釋比例
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抗體類型
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GAPDH分子量
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Rabbit
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WB 1:2000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
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多克隆抗體
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36-38 kD
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注：WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry;
IF, Immunofluorescence
本抗體如果用于常規(guī)的Western檢測(cè)，稀釋5000倍，使用5 ml抗體，至少可以檢測(cè)20次。
● 貯存形式：
穩(wěn)定溶液，1 mg/ml 抗體溶于PBS，50%甘油，pH7.2。
● 保存及運(yùn)輸條件：
-20℃保存，一年有效；避免反復(fù)凍融；濕冰運(yùn)輸。
● 使用說(shuō)明：
1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:2000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過(guò)夜。
2. 免疫熒光（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。
三 實(shí)驗(yàn)示例：
Jurkat總蛋白，細(xì)胞漿蛋白，細(xì)胞核蛋白GAPDH檢測(cè)
總蛋白提取：4×106 Jurkat細(xì)胞，2000 g 離心收集，去上清，沉淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分鐘，4℃ 16000 g 15 分鐘，上清即為總蛋白（TP）。
細(xì)胞漿蛋白：4×106 Jurkat細(xì)胞，2000 g 離心收集，加入400 μl細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A（加4 μl 100mM PMSF，加0.4 μl 1 M DTT），懸浮沉淀，冰浴15分鐘；加入20 μl細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B，混勻，冰上孵育1分鐘，震蕩5秒，4℃ 16000g 10分鐘，小心收集上清即為細(xì)胞漿蛋白（C-Pr），不要觸及沉淀。
細(xì)胞核蛋白提?。?/span>沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次，4℃ 16000 g 2分鐘；沉淀中加入200 μl 細(xì)胞核蛋白抽提試劑（加2 μl 100mM PMSF，加0.2 μl 1 M DTT），重懸沉淀，劇烈震蕩15秒，冰浴40分鐘，每間隔10分鐘劇烈震蕩15秒；4℃ 16000 g 5分鐘，上清即為細(xì)胞核蛋白（N-Pr）。
電泳：RTD6132-15%3.3C 200V 33-12 mA 55 min
轉(zhuǎn)膜：NC膜，1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液濕轉(zhuǎn)，穩(wěn)流400 mA，電壓變化64-57 V，轉(zhuǎn)膜時(shí)間35 min
封閉：無(wú)蛋白快速封閉液RT 20 min
一抗孵育：GAPDH 羊抗兔多抗，一抗稀釋液稀釋1：2000
二抗孵育：羊抗兔IgG-HRP，二抗稀釋液稀釋1：5000
檢測(cè)：ECL發(fā)光檢測(cè)