国产亚洲美女精品久久久2020_无码人妻精品一区二区三区久久久_中文无码在线观看高清免费_精品无人乱码一区二区三区

您好,歡迎光臨中科瑞泰!

免費(fèi)咨詢電話:
400-699-0631

首頁 > 細(xì)胞生物學(xué) > 細(xì)胞組織染色 > 普通染色

碘化丙啶染色液

碘化丙啶染色液

產(chǎn)品編號(hào):PE1080S

產(chǎn)品規(guī)格:1ml

數(shù)量
價(jià)格 ¥80


碘化丙啶染色液(Propidium Iodide Staining Solution

●  產(chǎn)品組成:

組分貨號(hào)

名稱

規(guī)格

貯存

PE1080S

碘化丙啶染色溶液

1 ml

-20

 

說明書

一份

 

● 產(chǎn)品簡介:

碘化丙啶(propidium iodide,PI),分子式C27H34I2N4 ,MW 668.39,CAS:25535-16-4。碘化丙啶不能穿過完整的活細(xì)胞膜,即正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞在不固定的情況下對PI拒染,而壞死細(xì)胞由于失去膜的完整性,PI可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合,根據(jù)此特點(diǎn),使用PI染色可鑒別死細(xì)胞。如果使用PI對活細(xì)胞染色必須在染色前進(jìn)行固定,以增加細(xì)胞膜對染料的通透性。PI經(jīng)常被用來與 Calcein-AM 或者 FDA等熒光探針一起使用,能同時(shí)對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。 PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 535 nm 和615 nm。常用于流式細(xì)胞儀分析和顯微鏡觀察,檢測細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)。

本產(chǎn)品為 PI 水溶液,濃度為 1 mg/ml(1.5 mM)。使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。

● 貯存:

-20℃保存,一年有效。

● 操作步驟:

懸浮細(xì)胞染色

1.1 500 g(2400 rpm,下同)離心收集細(xì)胞樣品于1.5 ml離心管內(nèi),加入0.5 ml固定液(貨號(hào):KA5010,卡諾固定液),緩緩懸起細(xì)胞,常溫固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。

1.2離心去盡固定液,用PBS洗兩遍,每次3分鐘,洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

1.3 細(xì)胞沉淀中加入200μl 1×PBS重懸,加入10 μl 碘化丙啶染色液,37℃避光染色10-15分鐘,手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

1.4 離心收集沉淀,重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光淬滅封片液(貨號(hào):AM0510)于載玻片上,加入等體積步驟1.4染色后細(xì)胞重懸液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

1.6 熒光顯微鏡下觀察可檢測到呈紅色的細(xì)胞核。激發(fā)波長為535 nm,發(fā)射波長為615 nm。

注:熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測。

貼壁細(xì)胞染色

2.1 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間,無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無菌的PBS洗滌三遍,再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜,生長至50%-80%滿度。

2.2刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后,吸盡培養(yǎng)液,加入0.5 ml固定液,固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。

2.3去盡固定液,用PBS洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。

2.4加入0.5 ml PBS,加入25 μl碘化丙啶染色液,37℃避光染色10-15分鐘,手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

2.5去盡染色液,用PBS洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。

2.6滴一滴抗熒光淬滅封片液(貨號(hào):AM0510)于載玻片上,蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片,讓細(xì)胞接觸封片液,盡量避免氣泡。

2.7熒光顯微鏡下觀察可檢測到呈紅色的細(xì)胞核。激發(fā)波長為535 nm,發(fā)射波長為615 nm。

注:熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測。

實(shí)驗(yàn)示例:


操作流程: 胰酶消化液消化,計(jì)數(shù)2×106/ml

 

500 g 3 min收集1.3 ml 293細(xì)胞,細(xì)胞密度2×106/ml;

 

細(xì)胞沉淀中加入1 ml卡諾固定液,常溫固定10 min;1×PBS漂洗兩次;

 

細(xì)胞沉淀中加入200μl 1×PBS,10 μl碘化丙啶染色液(1mg/ml),

 

37度避光染色10 min;

 

離心后細(xì)胞沉淀重懸于100 μl 1×PBS中;

 

取5 μl細(xì)胞懸液滴于載玻片上,加5 μl 抗熒光淬滅劑,封片觀察。




 
只有購買過該商品的用戶才能進(jìn)行評價(jià)。[發(fā)表評價(jià)]
国产亚洲美女精品久久久2020_无码人妻精品一区二区三区久久久_中文无码在线观看高清免费_精品无人乱码一区二区三区