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Hochest 33342活細胞染色液(100×)

Hochest 33342活細胞染色液(100×)

產(chǎn)品編號:HE1014S

產(chǎn)品規(guī)格:0.5ml

數(shù)量
價格 ¥300

Hochest 33342活細胞染色液(100×)

Hoechst 33342 Staining Solution for Live Cells(100×)

●  產(chǎn)品組成:

貨號

名稱

規(guī)格

HE1014S

Hochest 33342活細胞染色液(100×)

0.5 ml

 

說明書

一份

● 產(chǎn)品簡介:

Hoechst 33342,也稱bisBenzimide H 33342 或HOE 33342,分子式為C27H28N6O·3HCl ,分子量MW561.93,CAS: 23491-52-3,是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。Hoechst 33342 專一性地與雙鏈DNA結(jié)合(優(yōu)先結(jié)合AT),常用于細胞核染色。染色后可以用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342 的最大激發(fā)波長為346 nm(紫外激發(fā)),最大發(fā)射波長為460nm(藍色熒光);Hoechst 33342 和雙鏈DNA 結(jié)合后,最大激發(fā)波長為350nm,最大發(fā)射波長為461nm。另外,由于Hoechst 33342專一性結(jié)合DNA,不與RNA結(jié)合,樣品無需使用RNase處理。與DAPI相比,Hoechst 33342具有更好的膜通透性,更適合于活細胞的染色。

Hoechst 33342和Hoechst 33258相比,Hoechst 33342對細胞的毒性作用更小一些,33258穿透能力較33342弱,染活細胞時容易被"泵出",也就是拒染。所以一般來說Hoechst 33258用于細胞固定后再染色,而Hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色。

本染色液為100×濃度,使用終濃度為1×,可直接用于活細胞或組織的細胞核染色,也可稀釋后用于固定細胞或組織的細胞核染色。

貯存:

-20℃避光保存,一年有效。

● 操作步驟:

. 活細胞染色:

1.1 貼壁細胞:

1.1.1在培養(yǎng)液中均勻滴加適量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為1×,輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養(yǎng)的貼壁細胞,每孔有1 ml的培養(yǎng)液,每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產(chǎn)生干擾。

1.1.2在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度孵育10分鐘,可以直接在熒光顯微鏡下觀察。如果考慮到培養(yǎng)液對觀察效果的影響,進行以下操作步驟。

1.1.3吸除含染料的培養(yǎng)液,用PBS洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀察。

注:為避免凋亡細胞隨培養(yǎng)液或PBS被吸除,在吸除液體前,對于用多孔板中培養(yǎng)的細胞,最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經(jīng)漂浮起來的凋亡細胞。細胞發(fā)生凋亡時,會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。

1.2. 懸浮細胞:

1.2.1 在懸浮細胞培養(yǎng)液中加入適量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為1×,輕柔混勻。例如對于12孔板中培養(yǎng)的貼壁細胞,每孔有1 ml的培養(yǎng)液,每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產(chǎn)生干擾。

1.2.2 在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度孵育10分鐘,可以直接在熒光顯微鏡下觀察。如果考慮到培養(yǎng)液對觀察效果的影響,進行以下操作步驟。

1.2.3將細胞轉(zhuǎn)移到1.5 ml離心管中,500 g 離心5分鐘收集細胞。細胞沉淀用PBS洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。

1.2.4細胞沉淀中加入100-200 μl PBS,重懸沉淀。

1.2.6取5 μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上,加入等體積步驟1.2.4染色后細胞重懸液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

1.2.6 熒光顯微鏡使用紫外激發(fā),可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長350nm左右,發(fā)射波長460nm左右。

注:熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測。


. 實驗示例:



染色程序:

 Jurkat細胞密度調(diào)整到1×106/ml,六孔板接種2 ml,加入10 μl STS(星孢菌素)至終濃度1 μM

 37度培養(yǎng)3小時;加入20 μl Hochest 33342活細胞染色液(100×),RT避光染色15分鐘,熒光顯微鏡直接觀察。左圖為正常細胞(10×),右圖為STS誘導凋亡的細胞(10×)。



染色程序:

左為明場 20×相差;右為紫外激發(fā)

 293細胞消化后調(diào)整密度為1×105/ml;12孔板,每孔接種1 ml,37度培養(yǎng)30小時;加入10 μl Hochest 33342活細胞染色液(100×);37度培養(yǎng)10分鐘,直接觀察。




 
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