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革蘭氏染色試劑盒

革蘭氏染色試劑盒

產(chǎn)品編號:GS1080

產(chǎn)品規(guī)格:100ml

數(shù)量
價格 ¥200

革蘭氏染色試劑盒(Gram Staining Kit

●  產(chǎn)品組成:

組分貨號

名稱

規(guī)格

貯存

運輸

GS1080-01

結(jié)晶紫染色液

100 ml

RT

RT

GS1080-02

革蘭氏碘液

100 ml

RT

RT

GS1080-03

脫色液(95%酒精)

100 ml

RT

RT

GS1080-04

番紅染色液

100 ml

RT

RT

 

說明書

一份

 

 

產(chǎn)品簡介:

革蘭氏染色法(Gram Stain)是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,革蘭氏陽性菌細胞壁較厚,肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,乙醇脫色時,肽聚糖脫水使孔徑縮小,故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細胞膜上,呈紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,脫色后類脂外膜迅速溶解,縫隙加大,結(jié)晶紫與碘復(fù)合物溶出,因此乙醇脫色后再經(jīng)番紅復(fù)染,呈紅色。

貯存和運輸:

常溫保存,有效期一年;常溫運輸。

操作步驟:

標(biāo)本處理:

有菌部位的標(biāo)本,如痰液、糞便、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片。

無菌部位的標(biāo)本,如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關(guān)節(jié)液等,應(yīng)取適量標(biāo)本(最高可達

5-7 ml,經(jīng) 3000rpm 離心 10min,取沉渣涂片染色。

涂片制作:

菌液涂片時,用接種環(huán)沾取菌液點在載玻片上,標(biāo)本可直接在玻片上涂布;菌落涂片時,先取生理鹽水一滴,置載玻片上,用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應(yīng)自然干燥,并經(jīng)火焰固定,固定的溫度不宜過高,以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn),否則可能使細菌形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色。

染色

一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟,具體操作方法是:

3.1 初染:加上結(jié)晶紫染色液后,染色 1 分鐘,水洗。

3.2 媒染:加上革蘭氏碘液后染色 1 分鐘,水洗。

3.3 脫色:加上脫色液(95%酒精),搖動玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色約 20-60秒,水洗,吸去水分。

3.4 復(fù)染:加上番紅染色液后,染色 1 分鐘,水洗,吸干或在空氣中涼干后,油鏡鏡檢。

結(jié)果:

葡萄球菌:紫色、球形、葡萄狀排列。大腸桿菌:紅色、桿狀、散在排列。

          葡萄球菌-革蘭氏陽性菌  紫色                             大腸桿菌-革蘭氏陰性菌 紅色

革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結(jié)果,如陽性菌培養(yǎng)時間過長,或已死亡及部分菌體自行溶解,都常呈陰性反應(yīng)。

● 注意事項:

1.標(biāo)本涂片不能太厚,嚴(yán)格按操作要求進行。若涂片較厚,應(yīng)延長脫色時間,直至不再出現(xiàn)紫色為止。

2.玻片通過火焰溫度不能太高。

3.革蘭氏碘液變透明,則不能使用。

4.水洗時動作要輕柔,沿載玻片對角線方向用洗瓶沖洗,以免把菌體沖掉。


 
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