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離心式快速脫鹽柱(5 kD)

離心式快速脫鹽柱(5 kD)

產(chǎn)品編號:DS0540

產(chǎn)品規(guī)格:20套/包

數(shù)量
價格 ¥600

離心式快速脫鹽柱(5 kD)

貨號

名稱

規(guī)格

DS0540

離心式快速脫鹽柱(5 kD)

20/

● 產(chǎn)品介紹

離心式快速脫鹽柱根據(jù)排阻層析原理可以出色地完成蛋白脫鹽或緩沖液置換,適用于高于5 kD蛋白樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子去除。該產(chǎn)品回收率高,幾乎等體積回收蛋白樣品,在脫鹽的同時保持高回收率,樣品不會被稀釋。簡單使用離心操作,無需裝柱,代替比較耗時的傳統(tǒng)透析處理,以達(dá)到快速蛋白樣品脫鹽純化以及替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的。

脫鹽柱參數(shù)如下:

排阻極限 Mr

填料溶脹后體積

處理樣品體積

回收率

工作pH

5000 Da

~0.6 ml

100-200 μl

70-90%

2-13

● 貯存、運輸和效期:

常溫貯存(不能冷凍);常溫運輸;有效期兩年。

● 注意事項:

1. 操作方便,免去了繁瑣的透析過程,15-20分鐘內(nèi)即可完成樣品處理。

2. 本脫鹽柱建議一次性使用,不建議重復(fù)使用。

● 操作步驟

1. 取脫鹽柱,放入2 ml收集管中。  

2. 加入400 μl滅菌水或樣品所需的緩沖液,常溫靜置5 min,1000×g(約3000 rpm)離心2 min。

注:離心力不要高于1000 g,過高的離心力會損傷填料,降低脫鹽效率。

3. 重復(fù)步驟2操作2次。

4. 樣品準(zhǔn)備:

樣品在上樣前建議離心取上清或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾,減少雜質(zhì)影響。

5. 脫鹽處理:

脫鹽柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中,脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白樣品,靜置30秒,1000×g(約3000 rpm)離心2 min,收集回收樣品,保存?zhèn)溆谩?

注:為了確保從小體積樣品中獲得最大的蛋白回收效率,低于100 μl樣品上樣后要在樣品完全吸收后向填料中加入適當(dāng)體積的超純水或緩沖液壓層,使得總上樣體積為100 μl。

注意事項

1. 回收效果:樣品脫鹽后的回收率與樣品的濃度,以及上樣體積相關(guān)。樣品濃度越高,其回收率越高;同時在推薦的樣品上樣量范圍內(nèi),上樣量越大,其回收率也會隨之升高。通常脫鹽后蛋白的回收率在70-90%。

2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi),該脫鹽柱最多處理體積是200 μl樣品,過多會導(dǎo)致收集 

管中液體浸沒到脫鹽柱。

3. 填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會有失水收縮現(xiàn)象,請勿將上述溶液進(jìn)行過柱;

4. 加樣時盡量均勻加至管中心位置;

5. 當(dāng)樣品濃度過低時(<0.01 mg/ml),需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。

常見問題

常見問題

可能原因

解決方法

蛋白回收率偏低

1、蛋白濃度過低(<0.01 mg/ml)

2、所置換的緩沖液成分或pH非最適緩沖液,產(chǎn)生了非特異性吸附

1、現(xiàn)對蛋白液進(jìn)行適當(dāng)濃縮后脫鹽

2、更換適合的緩沖液,并充分平衡預(yù)裝柱2-3

蛋白回收后出現(xiàn)渾濁或沉淀

1、緩沖液非最適緩沖液

2、緩沖液中的某些離子被除去了,導(dǎo)致蛋白質(zhì)等電點聚沉

更換適合的緩沖液,并充分平衡預(yù)裝柱2-3

脫鹽不干凈

鹽離子濃度過高(>0.5 M

根據(jù)鹽離子濃度適當(dāng)增加脫鹽次數(shù)或稀釋后脫鹽

 實驗示例:


          離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1(lane1-5):細(xì)菌裂解物(正常鹽濃度)
lane1,2,3:細(xì)菌裂解物上樣5μl,4μl,3μl;
lane4,5:100μl細(xì)菌裂解物經(jīng)過脫鹽柱處理后,上樣5μl
lane 4:S公司脫鹽柱;lane 5:Real-Times脫鹽柱
結(jié)論:脫鹽柱對裂解物所有蛋白都有較好的回收率(80%)

樣品2(lane 6-8):BSA溶液
lane 6: BSA水溶液(0.4μg/μl)上樣量5μl(2μg)
lane 7:BSA 0.5M NaCl溶液(0.4μg/μl)上樣量5μl(2μg) 
lane 8:BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結(jié)論:脫鹽柱脫鹽處理效果明顯(含鹽BSA電泳泳道明顯變寬)
           脫鹽后的BSA回收率可達(dá)90%

脫鹽程序:脫鹽柱中加入400μl超純水,常溫靜置5min,1000 g
離心3min,重復(fù)2次;脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中,加入0.1ml
細(xì)菌裂解物或0.2ml BSA溶液,靜置30S,1000g離心3min。

電泳:4-18% RealPAGE預(yù)制膠,1×TGS,200V 37-13mA 53min,
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。


 
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