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細胞膜紅色熒光染色試劑盒(DiI)

細胞膜紅色熒光染色試劑盒(DiI)

產(chǎn)品編號:CD2040

產(chǎn)品規(guī)格:200-1000次

數(shù)量
價格 ¥400

細胞膜紅色熒光染色試劑盒(DiI

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

CD2040

細胞膜紅色熒光染色試劑盒(DiI

200-1000

 

產(chǎn)品介紹:

細胞膜紅色熒光染色試劑盒(DiI),Cell Plasma Membrane Staining Kit with DiI (Red Fluorescence)是一種以DiI為熒光探針,能夠快速靈敏地對細胞膜進行紅色熒光染色標記的試劑盒。


DiI在進入細胞膜之前熒光非常弱,僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光,DiI和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考上圖。其中,最大激發(fā)波長為549nm,最大發(fā)射波長為565nm。

本試劑盒如果用于流式細胞儀,每個樣品的檢測體系體積為0.5 ml時,可以進行200次檢測;96孔板每孔檢測體系的體積為100 μl時可以進行1000次檢測。

產(chǎn)品組成:

組份貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貯存

CD2040-01

DiI400×)

0.25 ml

-20

CD2040-02

染色緩沖液

100 ml

4

-

說明書

1

 

● 貯存:

DiI(400×) -20℃避光保存,一年有效。染色緩沖液可以4℃貯存。

使用說明:

1. 細胞膜染色工作液制備:

 

細胞膜染色工作液配制量

 

1 ml

10 ml

DiI400×

2.5 μl

25 μl

染色緩沖液

997.5 μl

9.975 ml

細胞膜染色工作液的用量:對于6、12、24、96孔板,每孔的細胞膜染色工作液分別為1~2ml、0.5~1ml、300~500μl和50~100μl;對于流式細胞樣品,每個樣品的細胞膜染色工作液為0.5ml;對于切片,可以根據(jù)切片大小,每個切片使用100-200μl的細胞膜染色工作液。

注:不同細胞的最佳染色濃度略有不同,細胞膜染色工作液的最終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系進行優(yōu)化,可在1:100-1:400之間進行調(diào)整。

2. 懸浮活細胞染色:

2.1 加入適當體積的細胞膜染色工作液重懸細胞,使其密度為1×106/ml左右。

2.2 37℃避光孵育細胞5-20 min,不同的細胞最佳孵育時間不同。以5 min作為初始孵育時間,根據(jù)實際所用的細胞優(yōu)化染色時間,以得到最佳的熒光染色效果。

2.3 500×g常溫離心5 min。

2.4 吸除上清液,緩慢加入37℃預(yù)熱的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

2.5 用細胞培養(yǎng)重復(fù)漂洗沉淀一次。

2.6 流式細胞儀檢測,或?qū)⒓毎馄^察,封片時請避免使用含有甘油或其它有機物的封片劑,否則會影響染色并增加熒光背景,可以直接用PBS封片,在熒光顯微鏡下觀察。

3. 貼壁活細胞染色:

3.1 將貼壁細胞種于細胞培養(yǎng)皿、多孔細胞培養(yǎng)板或者細胞爬片上。

3.2 吸除細胞培養(yǎng)液,用PBS洗滌細胞2次。

3.3 加入適當體積的細胞膜染色工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

3.4 37℃避光孵育細胞5-20 min,不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。以5min作為初始孵育時間,根據(jù)實際所用的細胞優(yōu)化染色時間,以得到最佳的熒光染色效果。

3.5 吸除細胞膜染色工作液,用PBS洗滌2次,然后加入37℃預(yù)熱的細胞培養(yǎng)液即可在熒光顯微鏡下觀察。

4. 固定后細胞或切片的染色:

注:DiI不建議用于固定后細胞或組織的染色,因為細胞固定后影響了細胞膜的結(jié)構(gòu),不能準確反映熒光標記位置。以下步驟僅供參考:

4.1. 使用4%多聚甲醛固定液進行固定。

4.2 吸除固定液,用PBS洗滌細胞3遍。

4.3 使用配制在PBS中的0.1% Triton X-100進行通透,常溫10 min。然后用PBS洗滌細胞3遍。

4.4按照免疫染色的方法進行抗體的孵育或用其它染料進行染色。注意:抗體孵育步驟中的封閉液、抗體稀釋液及洗滌液不能含有去垢劑。

4.5加入適當體積的細胞膜染色工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞或樣品。

4.6 37℃避光孵育5-20 min,最佳染色時間需要根據(jù)自己的實驗條件摸索,以達到最佳的熒光染色效果。

4.7吸除細胞膜染色工作液,用PBS洗滌2-3次,隨后即可在熒光顯微鏡下觀察。

實驗示例:


操作程序:293細胞調(diào)整密度1×105/ml,接種到6孔板中,培養(yǎng)30小時;去除培養(yǎng)基,PBS漂洗一次;33342染色37度10分鐘,去除33342染色液,加1.5 ml PBS,觀察拍照(40×)(圖A);去除PBS,DiI染色,37度10分鐘,去除DiI染色液,加1.5ml PBS,觀察拍照(40×)(圖B)


 
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