Aureobasidin A Solution

金擔(dān)子素A溶液 1mg/ml

● 產(chǎn)品包裝：

● Storage：-20℃

Stock solutions may be stored at-20°Cfor up to 12 months

● Specifications:

Appearance:  Colorless, Clear methanol liquid

Sterilization：Filtration

Concentration：1mg/ml in methanol

●    Introduction：

一、關(guān)于AbA：

金擔(dān)子素A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力。AbA作用機(jī)制是抑制酵母中AUR1基因編碼的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而殺死菌株。AbA在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/ml）即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性。編碼IPC合成酶的基因研究較多的來自釀酒酵母菌的AUR1基因，以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對(duì)編碼AUR1-C基因進(jìn)行突變即可使得菌株對(duì)AbA產(chǎn)生抗性，作為蛋白質(zhì)互作研究的報(bào)告基因。

因?yàn)锳bA可以直接殺死敏感的酵母菌株，而不是延遲菌株生長(zhǎng)，所以AbA篩選有利于陽性克隆的生長(zhǎng)和識(shí)別。與營(yíng)養(yǎng)報(bào)告基因（如HIS3）進(jìn)行低嚴(yán)緊度初篩相比，AbA篩選大大消除了背景克隆。實(shí)際操作中，用AbA進(jìn)行初篩時(shí)會(huì)獲得更多克隆，之后再用4個(gè)報(bào)告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)進(jìn)行高嚴(yán)緊度的二次篩選以驗(yàn)證陽性克隆。AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記；也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子，可以簡(jiǎn)化酵母雙雜交文庫(kù)篩選。

二、使用方法：

1.本品為AbA的甲醇溶液，濃度為1 mg/ml，直接用作儲(chǔ)存液。

2.滅菌后YPD Agar培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃，加入適量的AbA儲(chǔ)液，倒板備用。（AbA工作濃度取決于宿主細(xì)胞的敏感度，見下表）

3.制備酵母感受態(tài)細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化。

4.把100 μl完成轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞懸液涂到含有適量AbA的YPD Agar培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)2-4天。

5.挑取克隆鑒定，或統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)化效率。

三、不同菌株建議AbA的工作濃度：

四、對(duì)AbA敏感的真菌：

出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構(gòu)巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。